蛋白质印迹概述
免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是一种类似于ELISA的技术，都是利用特异性抗体识别特定的抗原。免疫印迹的特点是通过SDS-PAGE分离蛋白质，蛋白质从凝胶转移到固相上，如硝化纤维素膜，再通过特定方法进行信号的放大。这种方法既拥有SDS-PAGE 的高分辨力又有着固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
常规HRP标记抗体
在常规的WB实验过程中一抗和二抗孵育是分开进行的，一抗37℃孵育1-2小时或者4℃孵育过夜，二抗37℃孵育0.5-1小时，每次抗体孵育后都会进行洗膜处理，一般清洗三次，每次清洗时间5-10min。而HRP标记抗体则是通过一系列的化学反应将HRP直接标记在一抗上，这样做的优势是可以大幅度的省去抗体孵育时间以及洗膜时间，大大提高WB实验的效率。一般市场上标记HRP的方法有两种，一种是戊二醛交联法，另一种是过碘酸钠氧化法，其共同原理都是活化抗体上的氨基酸基团，再将HRP共价修饰到抗体上，这些方法的缺点是显而易见的，在活化的同时会有很大概率破坏抗体的活性，影响下游实验，所以一般用HRP直标抗体进行WB实验稀释度都不是非常高，并且传统WB方式二抗的介入是能够大幅度提高灵敏度和信号值的，用单一HRP标记抗体缺少了二抗的放大作用，增加了假阴性的可能。
伯仪生物HRP标记抗体
为了克服常规HRP标记抗体活性差导致WB实验灵敏度低、信号值差的问题，伯仪生物自研了一种新的HRP标记方法，我们的实验结果表明，这种方式进行HRP标记效率非常高，并且在标记的同时不影响抗体本身的活性，所以我们的抗体稀释比值可以做的非常高。目前有四款HRP标记的标记抗体，分别为Anti Myc Antibody-HRP、Anti His Antibody-HRP、Anti DYKDDDDK Antibody-HRP和Anti HA Antibody-HRP。在进行WB实验时，NC膜或者PVDF膜封闭后，将HRP直标抗体按照1：30000-1：100000的比值进行稀释，37℃摇晃孵育0.5-1小时后常规洗膜即可进行ECL显色。
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